สามารถใช้หลอด PCR สำหรับ PCR เชิงปริมาณได้หรือไม่?

ปฏิกิริยาลูกโซ่โพลีเมอเรส (PCR) เป็นเทคนิคที่สำคัญในชีววิทยาโมเลกุลทำให้สามารถขยายลำดับดีเอ็นเอที่เฉพาะเจาะจงได้ PCR เชิงปริมาณ (qPCR) ซึ่งเป็นตัวแปรของ PCR ช่วยให้ปริมาณของปริมาณเริ่มต้นของ DNA ในตัวอย่าง องค์ประกอบที่สำคัญในทั้ง PCR และ QPCR คือหลอด PCR ในฐานะซัพพลายเออร์หลอด PCR ฉันมักถูกถามว่า: สามารถใช้หลอด PCR สำหรับ PCR เชิงปริมาณได้หรือไม่? ในบล็อกนี้เราจะสำรวจคำถามนี้โดยละเอียด

ทำความเข้าใจ PCR และ qPCR

ก่อนที่จะเจาะลึกลงไปในความเหมาะสมของหลอด PCR สำหรับ qPCR มันเป็นสิ่งสำคัญที่จะต้องเข้าใจความแตกต่างระหว่าง PCR และ qPCR PCR แบบดั้งเดิมเป็นวิธีการเชิงคุณภาพที่ขยาย DNA แบบทวีคูณ มันเกี่ยวข้องกับสามขั้นตอนหลัก: การสูญเสียสภาพการหลอมและการขยายซ้ำในรอบเพื่อเพิ่มปริมาณของลำดับดีเอ็นเอเป้าหมาย

ในทางกลับกัน qPCR หรือที่เรียกว่า PCR เวลาจริง - เวลาวัดปริมาณการขยาย DNA ในเวลาจริง นี่คือความสำเร็จผ่านการใช้สีย้อมฟลูออเรสเซนต์หรือโพรบที่ปล่อยสัญญาณตามสัดส่วนกับปริมาณของ DNA ที่ขยาย ข้อมูลที่รวบรวมระหว่าง qPCR สามารถใช้เพื่อกำหนดปริมาณเริ่มต้นของ DNA เป้าหมายในตัวอย่างทำให้เป็นเครื่องมือที่มีค่าในสาขาต่าง ๆ เช่นการวิเคราะห์การแสดงออกของยีนการตรวจจับเชื้อโรคและการวิจัยมะเร็ง

ลักษณะของหลอด PCR

หลอด PCR มีขนาดและรูปแบบต่างกันรวมถึงหลอด PCR 0.2 มล.-หลอด PCR 0.1 มล., และ8 แถบ PCR หลอด- โดยทั่วไปหลอดเหล่านี้ทำจากโพลีโพรพีลีนซึ่งเป็นวัสดุที่ทนต่อสารเคมีและสามารถทนต่ออุณหภูมิสูงที่จำเป็นสำหรับ PCR

คุณสมบัติที่สำคัญของหลอด PCR ได้แก่ :

การนำความร้อน: การนำความร้อนที่ดีเป็นสิ่งสำคัญสำหรับการถ่ายเทความร้อนที่มีประสิทธิภาพในระหว่างกระบวนการ PCR หลอด PCR ได้รับการออกแบบมาเพื่อถ่ายโอนความร้อนอย่างรวดเร็วและสม่ำเสมอเพื่อให้แน่ใจว่าการสูญเสีย DNA denaturation การหลอมและขั้นตอนการขยายเกิดขึ้นที่อุณหภูมิที่ถูกต้อง
มีผลผูกพันต่ำ: หลอด PCR ควรมีคุณสมบัติที่มีผลผูกพันต่ำเพื่อป้องกันการดูดซับของ DNA เอนไซม์และรีเอเจนต์อื่น ๆ สิ่งนี้ช่วยรักษาความสมบูรณ์ของส่วนผสมของปฏิกิริยาและทำให้มั่นใจได้ว่าผลลัพธ์ที่แม่นยำ
ความโปร่งใส: สำหรับ qPCR หลอดจะต้องมีความโปร่งใสเพื่อให้สามารถตรวจจับสัญญาณฟลูออเรสเซนต์ วัสดุหลอดไม่ควรรบกวนการวัดการเรืองแสง

สามารถใช้หลอด PCR มาตรฐานสำหรับ qPCR ได้หรือไม่?

คำตอบสั้น ๆ คือใช่ในกรณีส่วนใหญ่หลอด PCR มาตรฐานสามารถใช้สำหรับ qPCR อย่างไรก็ตามมีการพิจารณาบางอย่าง

ความเข้ากันได้กับเครื่องมือ qPCR

เครื่องมือ QPCR ส่วนใหญ่ได้รับการออกแบบมาเพื่อรองรับหลอด PCR มาตรฐาน ขนาดและรูปร่างของหลอดจำเป็นต้องพอดีกับบล็อกของเครื่องมือเพื่อให้แน่ใจว่าการถ่ายเทความร้อนที่มีประสิทธิภาพและการตรวจจับการเรืองแสงที่แม่นยำ ของเราหลอด PCR 0.2 มล.และหลอด PCR 0.1 มล.ได้รับการออกแบบให้เข้ากันได้กับเครื่องมือ qPCR ที่หลากหลายซึ่งให้ประสิทธิภาพที่ไม่ราบรื่นและเชื่อถือได้

สัญญาณรบกวนเรืองแสง

ดังที่ได้กล่าวไว้ก่อนหน้านี้ QPCR อาศัยการตรวจจับการเรืองแสง หลอด PCR มาตรฐานมักจะทำจากโพลีโพรพีลีนซึ่งโดยทั่วไปจะโปร่งใสและไม่รบกวนสัญญาณฟลูออเรสเซนต์อย่างมีนัยสำคัญ อย่างไรก็ตามหลอดที่มีคุณภาพต่ำกว่าอาจมีสิ่งสกปรกหรือสารเติมแต่งที่อาจทำให้เกิดการเรืองแสงพื้นหลังซึ่งนำไปสู่ผลลัพธ์ที่ไม่ถูกต้อง ในฐานะซัพพลายเออร์ท่อ PCR เรามั่นใจว่าหลอดของเราผลิตด้วยวัสดุที่มีคุณภาพสูงและได้รับการควบคุมคุณภาพอย่างเข้มงวดเพื่อลดการรบกวนการเรืองแสง

การระเหยและการควบแน่น

ในช่วง QPCR การระเหยและการควบแน่นอาจส่งผลกระทบต่อความถูกต้องของผลลัพธ์ หลอด PCR ที่มีการปิดผนึกที่เหมาะสมเป็นสิ่งจำเป็นเพื่อป้องกันการระเหยของส่วนผสมของปฏิกิริยา ของเรา8 แถบ PCR หลอดมาพร้อมกับหมวกที่ออกแบบมาอย่างดีซึ่งให้ตราประทับแน่นลดความเสี่ยงของการระเหยและการควบแน่น

pcr-tube (3) 0.2 Ml Pcr Tubes、0.1 Ml Pcr Tubes、8 Strip Pcr Tubes

ข้อดีของการใช้หลอด qPCR เฉพาะ

ในขณะที่หลอด PCR มาตรฐานสามารถใช้สำหรับ qPCR หลอด qPCR เฉพาะที่มีข้อได้เปรียบบางอย่าง

ประสิทธิภาพการเรืองแสงที่เพิ่มขึ้น

หลอด qPCR โดยเฉพาะได้รับการปรับให้เหมาะสมสำหรับการตรวจจับการเรืองแสง พวกเขาทำจากวัสดุที่มีการเรืองแสงพื้นหลังที่ต่ำกว่าช่วยให้ปริมาณดีเอ็นเอที่ไวและแม่นยำยิ่งขึ้น หลอดเหล่านี้ยังได้รับการออกแบบให้มีคุณสมบัติทางแสงที่สอดคล้องกันทั่วหลอดเพื่อให้มั่นใจว่าตรวจจับสัญญาณที่สม่ำเสมอ

ปรับปรุงความสม่ำเสมอของความร้อน

หลอด qPCR บางตัวได้รับการออกแบบทางวิศวกรรมเพื่อให้ความสม่ำเสมอทางความร้อนที่ดีขึ้นซึ่งเป็นสิ่งสำคัญสำหรับผลลัพธ์ที่แม่นยำและทำซ้ำได้ พวกเขาอาจมีความหนาของผนังที่บางลงหรือการออกแบบพิเศษที่ช่วยเพิ่มการถ่ายเทความร้อนลดความแปรปรวนของอุณหภูมิภายในหลอด

การประกันคุณภาพในการผลิตหลอด PCR

ในฐานะซัพพลายเออร์ PCR Tube เราเข้าใจถึงความสำคัญของคุณภาพในแอปพลิเคชัน qPCR กระบวนการผลิตของเราเป็นไปตามมาตรฐานการควบคุมคุณภาพที่เข้มงวด

การเลือกวัสดุ: เราเลือกวัสดุโพรพิลีนที่มีคุณภาพสูงอย่างระมัดระวังซึ่งปราศจากสิ่งสกปรกและสารเติมแต่งที่อาจรบกวน qPCR
กระบวนการขึ้นรูป: หลอดของเราผลิตขึ้นโดยใช้เทคนิคการขึ้นรูปขั้นสูงเพื่อให้แน่ใจว่ามีขนาดรูปร่างและความหนาของผนังที่สอดคล้องกัน สิ่งนี้ช่วยในการรักษาค่าการนำความร้อนที่สม่ำเสมอและคุณสมบัติการเรืองแสง
การทดสอบ: หลอด PCR แต่ละชุดผ่านการทดสอบอย่างเข้มงวดรวมถึงการทดสอบการเรืองแสงการทดสอบประสิทธิภาพความร้อนและการทดสอบการรั่วไหล เฉพาะท่อที่ตรงตามเกณฑ์คุณภาพที่เข้มงวดของเราเท่านั้นที่จะขาย

บทสรุป

โดยสรุปโดยทั่วไปหลอด PCR มาตรฐานสามารถใช้สำหรับ qPCR ได้หากพวกเขาตรงตามข้อกำหนดของค่าการนำความร้อนการผูกต่ำและความโปร่งใส อย่างไรก็ตามหลอด qPCR เฉพาะที่ทุ่มเทให้ประสิทธิภาพที่เพิ่มขึ้นในแง่ของการตรวจจับฟลูออเรสเซนต์และความสม่ำเสมอของความร้อน

ในฐานะซัพพลายเออร์หลอด PCR เรามุ่งมั่นที่จะให้หลอด PCR คุณภาพสูงที่เหมาะสมสำหรับการใช้งาน PCR และ QPCR ของเราหลอด PCR 0.2 มล.-หลอด PCR 0.1 มล., และ8 แถบ PCR หลอดได้รับการออกแบบมาเพื่อตอบสนองความต้องการที่หลากหลายของนักวิจัย

หากคุณกำลังมองหาหลอด PCR ที่เชื่อถือได้สำหรับการทดลอง qPCR ของคุณเราขอเชิญคุณติดต่อเราเพื่อขอข้อมูลเพิ่มเติมและเพื่อหารือเกี่ยวกับข้อกำหนดเฉพาะของคุณ เราอยู่ที่นี่เพื่อช่วยคุณค้นหาโซลูชันหลอด PCR ที่ดีที่สุดสำหรับห้องปฏิบัติการของคุณ

การอ้างอิง

Bustin, SA, Benes, V. , Garson, JA, Hellemans, J. , Huggett, J. , Kubista, M. , ... & Wittwer, CT (2009) แนวทาง MIQE: ข้อมูลขั้นต่ำสำหรับการเผยแพร่การทดลอง PCR แบบจริงเชิงปริมาณ เคมีคลินิก, 55 (4), 611 - 622
Nolan, T. , Hands, RE, & Bustin, SA (2006) ปริมาณของ mRNA โดยใช้จริง - เวลา RT - PCR โปรโตคอลธรรมชาติ, 1 (3), 1559 - 1582